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| 【】 目的 探讨超声靶向破坏微泡(UTMD)技术联合核定位信号(NLS)肽增强犬心肌hAng-1基因体内转染效率的可行性及应用价值。方法 构建犬急性心肌梗死模型并分组进行基因转染治疗。 分组：A组：空白对照组(n=8)；B组：UTMD pDNA组(n=8)；C组：UTMD pDNA cNLS组(n=8)；D组： UTMD pDNA mNLS组(n=8)；E组： UTMD pDNA cNLS WGA组(n=8)。①转染后3天,心肌冰冻切片检测EGFP标记的hAng-1基因表达情况,RT-PCR和Western Blot分别从基因和蛋白水平检测心肌组织hAng-1基因表达效率。②转染后28天,a-SMA免疫组化定位新生毛细血管,并在显微镜下计数新生微血管密度(MVD)；Masson染色及心脏大体标本评价梗死区纤维化程度及面积；③建模后1w及转染后28天分别行超声检查,二维超声心动图检测各组犬射血分数及室壁运动情况。比较各组基因治疗效果。结果 ①A、B、C组心肌组织中绿色荧光蛋白表达量逐渐增高,D、E组较C组逐渐减少,Western、PCR结果显示hAng-1蛋白及基因表达趋势与绿色荧光蛋白一致,C组与其他组比较差异有统计学意义(p＜0.05)。②免疫荧光结果显示C组毛细血管密度最高,C组与其他各组比较差异有统计学意义(p＜0.05)；Masson染色及心脏大体标本显示心肌纤维化程度A到C组依次减低,C、D、E组依次增高。③建模后1w,5组犬均可见节段性室壁运动减低且射血分数均明显减低,组间差异无统计学意义(p＞0.05)。转染后28天,A、E组心功能明显减低,B、D组轻度减低,C组轻度增高,C组与其他各组比较差异有统计学意义(p＜0.05)。结论 UTMD联合NLS可高效、靶向地介导质粒DNA在缺血心肌内的表达,并促进血管新生、改善心肌纤维化,这种非侵入性的技术在心脏基因治疗上很有前景。 |
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| 投稿时间：2016-10-23修订日期：2016-11-09 |
| 基金项目:国家自然科学(81471674)；青年科学(81501495) |
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| The enhanced effect of nuclear localization signal petide during the ultrasound targeted microbubbles destruction mediated gene transfection for treating Canine myocardial infarction |
| cuijingjing,hubo |
| (wuhandaxuerenminyiyuan) |
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